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Page:The Effects of Shexiang Baoxin Pill in Alzheimer's Disease and Inflammation.pdf/4

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血性疾病方面有良好功效[5]。因此本研究旨在探讨不同前处理方法下 SBP 对 神经分化、Aβ 聚集导致的神经细胞毒性及炎症反应的影响,初步探索 SBP 的 神经保护潜在作用。

2 材料与方法

2.1 药物与试剂

三个批次的 SBP 批号分别为:170725、171214 及 180110,均由上海和黄药 业 有 限 公 司 提 供。 四 噻 唑 蓝(Methylthiazoletrazolium,MTT) 购 自 Sigma。Dulbecco 改 良 的 Eagle 培 养 基(Dulbecco’s modified Eagle medium,DMEM)、胰蛋白酶和磷酸盐缓冲液(Phosphate-buffer saline,PBS)购自 Gibco。用于细胞培养的胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)、马血清(Horse serum,HS)及其他材料购自 Invitrogen(Carlsbad,CA)。

2.2 方法

2.2.1 SBP 的前处理方法

以下为不同前处理方法的 SBP 母液的制备:

SBP 水提液的制备:取不同批次 SBP,研磨成粉,以 1∶8(W ∶V)加入蒸馏水,37 ℃超声 30 分钟,收集滤液,剩余药粉以 1∶6(W ∶V)加入蒸馏水,37 ℃超声 30 分钟,收集滤液,合并两次滤液并冷冻干燥,制成 100 mg·mL-1 水提液;SBP 醇提液的制备:取不同批次 SBP,研磨成粉,以 1∶8(W ∶V)加入 95% 乙醇,37 ℃超声 30 分钟,收集滤液,剩余药粉以 1∶6(W∶V)加入 95% 乙醇,37 ℃超声 30 分钟,收集滤液,合并两次滤液,旋蒸并冷冻干燥,加入 DMSO 制成 100 mg·mL-1 醇提液 ; 以 DMSO 前处理 SBP:称取 1 g 各批次 SBP,溶于 2 mL DMSO,超声 30 分钟,制成 500 mg·mL-1 药液(SBP-DMSO); 以人工胃液前处理 SBP:在 50 mL 人工胃液(Simulated gastric fluid without enzyme, Fluka)中加入 0.16 g 胃蛋白酶(Pepsin),并调节至 pH=1.2,待胃蛋白酶充分溶解后,分别将三个批次 SBP 各称取 1 g,溶于 10 mL 的人工胃液中,充分涡旋混匀 , 超声 30 分钟,最