跳转到内容

Page:The Effects of Shexiang Baoxin Pill in Alzheimer's Disease and Inflammation.pdf/5

維基文庫,自由的圖書館
此頁尚未校對

终得到浓度为 100 mg·mL-1 的 SBP 药液(SBP-SGF)。

2.2.2 细胞培养及给药方式

PC12 细 胞(CRL-1721) 购 自 American Type Culture Collection(ATCC,Manassas,VA)。PC12 细胞置于 DMEM 培养液(含 6% 胎牛血清和马血清、100 U·mL-1 青霉素及 100 μg·mL-1 链霉素),在 37 ℃、7.5%CO2 及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养。细胞给药时,PC12 细胞置于低血清 DMEM 培养液(含 1% 胎牛血清和马血清、100 U·mL-1 青霉素及 100 U·mL-1 链霉素)中 3 小时,再置于含有各药液的低血清 DMEM 培养液中 48 小时。

RAW264.7 细 胞(TIB-71) 购 自 American Type Culture Collection(ATCC,Manassas,VA)。细胞置于 DMEM 培养基(含 10% 胎牛血清、100 U·mL-1 青霉素和 100 μg·mL-1 链霉素)中,在 37 ℃、5% CO2 及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养,隔天传代。细胞给药时,先用含不同前处理的 SBP 的完全培养基孵育 5 小时,后加入脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS,100 ng·mL-1)诱导炎症反应,继续培养 12 小时后收集细胞。

本研究中 DMSO 和 SGF 处理细胞时的体积比均控制在 0.1% 以内。

2.2.3 MTT 法测细胞毒性

利用 MTT 法进行细胞活力测定以确定每种药液的安全给药浓度范围,确保在该安全浓度范围内所有药液均不诱导细胞增殖或死亡。将 PC12 细胞接种到96 孔板,将 SBP 按照一定的浓度梯度处理细胞,48 小时后加入 5 mg·mL-1 的MTT,培养箱中孵育 3 小时,吸走含 MTT 的培养基,加入 DMSO,震荡 15 分钟后于 570 nm 中测量其吸光度值。

2.2.4 PC12 细胞轴突生长的形态学观察

PC12 细胞以 3×104/mL 接种于 6 孔板中,以培养基为空白对照,NGF(50 ng·mL-1)为阳性对照;以含有或不含低浓度 NGF(1.5 ng·mL-1)的每种药液处理 PC12 细胞 48 小时,每 24 小时供应新鲜培养基和药液。光镜下各组随机选择 10 个视野,利用 SPOT 软件显微镜测微尺测量各组分化细胞的细胞轴突长度。若一个或多个神经轴突长于细胞直径,则该细胞被归为分化细胞,根据其神经轴突长度分为不同组,即 < 15 μm 组、15-30 μm 组及 > 30 μm 组。