物 5’-AAC GGA TTT GGC CGT ATT GG-3’，下游引物 5’-CTT CCC GTT CAG CTC TGG G-3’。扩增条件为：95 ℃预变性 3 分钟；95 ℃变性 10 秒，60 ℃退火 20 秒，72 ℃延伸 30 秒，45 个循环。ΔΔCt 法分析基因的相对表达量。
2.2.8 统计学处理
数据以平均数 ± 标准差 (x ± s) 表示，采用 GraphPad Prism 统计分析软件进行单因素方差分析或 t 检验，其中 *p <0.05，**p <0.01，***p<0.001。
3 结果
3.1 不同前处理的 SBP 药液对 PC12 细胞分化的影响
通过 MTT 实验我们得到了四种不同前处理 SBP 的最佳给药终浓度，分别为 500 μg·mL-1（水提液）、100 μg·mL-1（醇提液）、100 μg·mL-1 (SBP-DMSO)和 25 μg·mL-1（SBP-SGF）。具体方式为：SBP 水提液母液（100 mg·mL-1）以 1∶200的体积比加入到细胞培养基中，得到细胞给药终浓度为 500 μg·mL-1；SBP 醇提液母液（100 mg·mL-1）以 1∶1000 的体积比加入到细胞培养基中，得到细胞给药终浓度为 100 μg·mL-1；SBP-DMSO 母液（500 mg·mL-1）先用 DMSO稀释至 100 mg·mL-1，再以 1:1000 的体积比加入到细胞培养基中，得到细胞给 药 终 浓 度 为 100 μg·mL-1；SBP-SGF 母 液（100 mg·mL-1） 先 稀 释 至 25 mg·mL-1，再以 1∶1000 的体积比加入到细胞培养基中，得到细胞给药终浓度为 25 μg·mL-1。
用 NGF（50 ng·mL-1）处理的 PC12 细胞会停止分裂并进行终末分化，此模型被广泛地用于研究神经元分化过程。通过观察形态学变化，与对照组相比，50 ng·mL-1 的 NGF 可显著诱导 PC12 细胞分化，即促进细胞轴突生长；低浓度的 NGF（1.5 ng·mL-1）则无法诱导 PC12 细胞轴突生长；不同前处理的 SBP 单独处理，也可不同程度地诱导 PC12 细胞轴突生长（图 1-A）。而比较图 1-A 中各种药液单独处理组和各药液与 NGF 共同处理组可以发现，不同前处理的 SBP可协同 1.5 ng·mL-1 NGF 显著地促进 PC12 细胞轴突生长。此结果在对神经轴突长度的统计结果中也得到了证明（图 1-B）。
